마우스 두개골 창 수술 & 헤드링 이식 방법 참고

각성 마우스의 in vivo 이광자 이미징의 첫 단계는 대개 깔끔한 개두·두개골 창 수술(크래니얼 윈도우)과 헤드링 이식입니다. 창이 투명한지, 헤드링이 견고하게 고정되었는지는 이후 이미징의 성패를 직접 좌우합니다. 본 글에서는 술전 준비부터 술후 관리까지 전체 과정을 그림과 함께 정리하여 연구자들의 참고 자료로 제공합니다.

마우스 두개골 창 수술 과정 개요

술전 준비 (기구 및 소모품)

술전 준비 기구와 소모품

구체적인 수술 단계

단계 1: 마취된 마우스 고정

• 마취된 마우스의 이빨을 수술대의 마취 마스크에 겁니다.
• 이어바로 마우스의 머리를 고정하고, 여러 방향의 노브를 돌려 머리 위치를 조절합니다.
• 핀셋으로 머리 고정 상태를 확인하고, 뚜렷한 움직임이 없으면 다음 단계로 진행합니다.

단계 2: 안연고를 발라 눈 보호

• 마우스의 눈에 에리스로마이신 안연고를 발라 이후 단계에서 눈을 보호합니다.

단계 3: 마우스 털 제거

• 안과용 수술 가위로 마우스 정수리의 털을 조심스럽게 잘라냅니다. 눈 부위를 자르지 않도록 주의하십시오.

단계 4: 포비돈 요오드로 소독

• 포비돈 요오드 소독액으로 마우스 정수리를 소독합니다.

단계 5: 두피를 절개하여 두개골 노출

• 별도의 깨끗한 수술 가위와 핀셋을 사용하여, 먼저 정수리 중앙에 절개를 낸 다음, 양쪽으로 눈 위쪽을 향해 호를 그리며 잘라 두개골 전체를 노출시킵니다.
• 두피를 절개하여 두개골을 노출한 후, 두개골이 비교적 수평인지 관찰한 다음 2차 조정을 수행합니다.

단계 6: 과산화수소로 골막 처리

• 면봉에 과산화수소 용액을 묻혀 마우스 두개골에 조심스럽게 도포합니다. 5~10초 기다린 후 생리식염수로 여분의 과산화수소 용액을 씻어냅니다.

단계 7: 골막 제거

• 수술 가위와 핀셋으로 골막을 조심스럽게 제거합니다. 이어서 핀셋으로 솜을 잡아 두개골 표면을 청소하고, 고무 벌브 블로어로 바람을 불어 두개골을 건조시킵니다.

단계 8: 두개골 드릴로 개창

• 개창에는 0.5mm 버를 중속으로 사용하여 창 위치를 연삭하기 시작합니다.
• 먼저 창의 윤곽을 연삭합니다. 윤곽 크기는 커버글라스 직경보다 약간 작게 하고, 윤곽을 낸 후 한 바퀴씩 윤곽을 깊게 합니다.
• 연삭 과정에서는 집중을 유지하고, 두 손으로 조작하여 동작을 안정적으로 하며, 상황에 따라 블로어로 뼛가루를 불어내고, 연삭 중에는 생리식염수로 창을 적셔 연삭 온도가 너무 높아지지 않도록 합니다.
• 버로 창의 두개골을 가볍게 눌러 큰 흔들림이 관찰되면 연삭을 멈추고 다음 단계를 준비합니다.

단계 9: 두개골 편 제거

• 생리식염수로 솜을 적셔 두개골 뼛가루를 청소하고 창을 적십니다.
• 그런 다음 마른 솜으로 생리식염수를 닦아내고, 다시 블로어로 두개골 표면을 건조시킵니다.
• 핀셋을 창의 연삭된 윤곽을 따라 가볍게 들어올려, 창의 두개골을 천천히 젖혀 들어 올려 제거합니다.
• 지혈 스펀지를 창에 대어 지혈하고, 항상 출혈 상황을 관찰하며 두개골 표면을 깨끗하게 유지합니다. 창의 혈관이 더 이상 출혈하지 않으면 다음 단계로 진행합니다.

단계 10: 접착제로 두개골 덮기

• 3M 접착제를 마우스 두개골 표면에 고르게 바르고 완전히 덮이도록 합니다. 접착제는 프라이머 역할을 하여 두개골과 레진의 접착을 더욱 견고하게 합니다.
• 그런 다음 청색광 경화 램프로 20초간 조사하여 접착제를 완전히 경화시킨 후 다음 작업을 진행합니다.

단계 11: 창 커버글라스 고정

• 먼저 창 주위(커버글라스 직경보다 약간 큰 윤곽)에 적당량의 3M 유동성 레진을 가볍게 바릅니다. 레진이 너무 많으면 창 안으로 스며들어 수술 실패를 초래할 수 있습니다.
• 커버글라스를 창 위에 올려 위치를 조정하고, 핀셋으로 가볍게 눌러 고정합니다.
• 그런 다음 청색광 경화 램프로 3M 유동성 레진을 20초간 조사하여 커버글라스 위치를 초기 고정합니다.
• 이어서 커버글라스 표면 주위에 3M 유동성 레진을 한 층 덮어 위아래 두 층의 레진으로 커버글라스를 끼우고, 청색광 경화 램프로 20초간 조사하여 완전히 경화시켜 창 커버글라스 고정을 완료합니다.

단계 12: 헤드링 고정

• 먼저 건조한 두개골 표면을 3M 유동성 레진으로 완전히 덮습니다.
• 핀셋으로 헤드링을 3M 유동성 레진 위에 올립니다. 헤드링의 4개 노치 방향에 주의하고, 헤드링 바닥면을 가능한 한 창 커버글라스와 평행하게 조정합니다. 그렇지 않으면 현미경 관찰 시 이미징 품질에 영향을 줄 수 있습니다.
• 헤드링의 최종 위치를 확정한 후, 청색광 경화 램프로 3M 유동성 레진을 20초간 조사하여 완전히 경화시킵니다.
• 헤드링 위쪽과 주위에 3M 유동성 레진을 한 층 바르고, 청색광 경화 램프로 20초간 조사하여 헤드링 고정을 보강합니다. 마지막으로 고정된 마우스를 떼어내어 전체 수술을 완료합니다.

부록: 마우스 수술 감염 예방 조치 및 술후 관리

1. 실험 환경을 비교적 독립적이고 밀폐된 상태로 유지합니다.
2. 수술 기구를 소독합니다.
3. 멸균 면봉, 멸균 생리식염수를 사용합니다.
4. 커버글라스, 헤드링은 초음파 세척 후 알코올에 담가둡니다.
5. 개창 후 케토프로펜과 젠타마이신을 주사하여 항염증 처치합니다.
6. 수술 후 매일 자외선 램프로 소독합니다.

이상의 내용은 연구·학습 참고용으로만 제공됩니다. 부적절한 점이 있으면 지적과 보완을 환영합니다. 자세한 시술 영상이나 관련 자료가 필요하면 본 페이지 하단의 연락처로 문의해 주십시오.

회사 소개

SITRANTECH는 생물의학 공학 분야에 깊이 몰두하며 일선 연구실과 5년 이상 긴밀히 협력해 왔습니다. 신경과학, 행동학, 광유전학 등의 연구 분야에 각성 마우스 머리 고정 트레드밀 시스템, 머리 고정 시스템과 행동 실험을 결합한 맞춤형 실험, 두개골 창 수술 관련 소모품과 부속품, 그리고 실험 장비 맞춤 제작 및 기술 컨설팅 서비스를 오랫동안 제공하고 있습니다. 우리의 사명은 간단합니다: 정밀 공학으로 과학적 발견을 지원하고, 혁신을 실험실에서 실제 응용으로 이끄는 것입니다.